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關(guān)于鱟試劑的實驗方法你了解多少?

更新時間:2022-01-24

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   鱟試劑主要成分是鱟血細(xì)胞溶解物經(jīng)氯仿處理去除了抗脂多糖因子,并加入適量二價鈣、鎂離子,含有C、B、G因子。
  因此,科學(xué)家認(rèn)為血液呈淡藍(lán)色的鱟在醫(yī)學(xué)研究中有*作用。用鱟血制成試劑,再滴入注射液,若試劑立即凝固或變色,就說明注射液內(nèi)含有使人發(fā)熱、休克甚至死亡的細(xì)菌內(nèi)毒素。
  此外,鱟為國家二級保護動物,我們呼吁政府和民間共同加強該“活化石”生物的保護。
  鱟試劑是從棲生于海洋的節(jié)肢動物“鱟”的藍(lán)色血液中提取變形細(xì)胞溶解物,經(jīng)低溫冷凍干燥而成的生物試劑,專用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測和真菌(1,3)-β-D-葡聚糖檢測。
  鱟試驗法是國際上檢測內(nèi)毒素好的方法,它簡單﹑快速﹑靈敏﹑準(zhǔn)確,因而被歐美藥典及我國藥典定為法定內(nèi)毒素檢查法,并已被世界各國所采用。能生產(chǎn)鱟試劑的主要有美國、日本、中國等國家。
  實驗方法:
  鱟試劑按實驗方法可分為:凝膠法、動態(tài)濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑、終點顯色法鱟試劑。
  凝膠法系通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來定性檢測或半定量內(nèi)毒素的方法。凝膠法是通過觀察有無凝膠形成作為反應(yīng)的終點。此法操作比較簡單,經(jīng)濟,不需要專用測定設(shè)備,可以進行定性或半定量測定。
  凝膠法鱟試劑常見規(guī)格為0.1ml/支或0.2ml/支的單個測試或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶裝的多個測試。使用時一般應(yīng)加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水復(fù)溶后使用。
  特異性鱟試劑,即棄G因子鱟試劑,國內(nèi)的產(chǎn)品,它專一對內(nèi)毒素起反應(yīng),避免了G因子旁路的干擾,使檢測結(jié)果更加可靠,在藥檢和臨床檢驗方面是*的理想檢測試劑。
  動態(tài)濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑、終點顯色法鱟試劑,這四種方法都是定量檢測內(nèi)毒素的。這幾種定量法鱟試劑統(tǒng)稱光度法鱟試劑。
  根據(jù)檢測原理,終點濁度法和動態(tài)濁度法都屬于濁度法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化而測定內(nèi)毒素含量的方法。終點濁度法未見商品化產(chǎn)品。動態(tài)濁度法(又稱動態(tài)比濁法)是檢測反應(yīng)混合物的濁度上升某一預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時間,或是檢測濁度增加速度的方法。
  動態(tài)濁度法的特點為:1. 能準(zhǔn)確定量。2.檢測范圍寬,可達(dá)4個數(shù)量級。3.靈敏度高達(dá)0.005EU/ml。4. 操作簡便,系統(tǒng)自動檢測分析,一步即成。5. 經(jīng)濟實用,試劑樣品需要量少,可降至50μL。6. 和微生物檢測系統(tǒng)Elx808(配套IU)及專用軟件TALgent使用,一次可同時檢測多達(dá)96個樣品。
  終點顯色法和動態(tài)顯色法都是屬于顯色基質(zhì)法。顯色基質(zhì)法系利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中產(chǎn)生的凝固酶使特定底物顯色釋放出的呈色團的多少而測定內(nèi)毒素含量的方法,根據(jù)產(chǎn)物顏色判斷內(nèi)毒素濃度,又稱為比色法。顯色基質(zhì)法由于不依賴凝固蛋白形成凝膠,抗干擾能力強,特別適用于生物制品(蛋白、疫苗等)和臨床樣品(黃疸、血液、尿液)的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測。
  終點顯色法是反應(yīng)時間最短的鱟試驗法,只需要16分鐘就能得出結(jié)果。而且可以偶氮化染色劑,避開某些有色檢品自身顏色對鱟試驗的干擾。終點顯色法不需要特殊的檢測儀器就能準(zhǔn)確定量。
  動態(tài)顯色法鱟試劑兼有動態(tài)濁度法和終點顯色法鱟試劑的優(yōu)點,抗干擾能力強,使用簡單方便,檢測范圍寬,靈敏度高達(dá)0.005EU/ml, 是世界上好的鱟試劑。但是價格較高。
  如果您僅需要檢測樣品的內(nèi)毒素*,可以選擇凝膠法鱟試劑,通過確定內(nèi)毒素限值及最大有效稀釋倍數(shù),做樣品的干擾試驗從而確定使用的鱟試劑的靈敏度。如果您需要定量測定樣品中內(nèi)毒素含量則應(yīng)選擇顯色基質(zhì)鱟試劑盒或動態(tài)濁度法鱟試劑。日常檢測量不大時,可以選擇終點顯色法鱟試劑,用普通的分光光度計就可完成實驗。如果您檢測的樣品是生物制品、疫苗、血液制品等最好選用終點顯色法鱟試劑或動態(tài)顯色法鱟試劑。如果您日常的檢測量比較大,檢測的樣品對鱟試劑的干擾不大,可選用動態(tài)濁度法鱟試劑。動態(tài)濁度法鱟試劑特別適用于制藥企業(yè)對產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的內(nèi)毒素水平的監(jiān)控。動態(tài)濁度法與動態(tài)顯色法需要帶溫育系統(tǒng)的動態(tài)光度測定儀器及配套軟件。微生物檢測系統(tǒng)El808(配套IU)適用于所有的定量法鱟試驗。
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